Peter Parker là một cậu học sinh trung học,bố mẹ bỏ đi từ nhỏ nên cậu sống cùng bác là Ben Parker và vợ-May Parker. Ở trường, Peter thường bị bắt nạt bởi Flash, một tên côn đồ, nhưng cũng chính vì một lần bị Flash đánh mà Peter quen được Gwen Stacy. Peter thích Gwen từ đó.Trong một chuyến giả danh thám hiểm Toà nhà Oscorp, Peter vô tình rơi vào khu thí nghiệm nhện và bị nhện cắn - cơ thể được cường hoá và có thể leo tường cũng như nhả tơ. Với bộ óc thiên tài, Peter sáng chế máy bắn tơ nhân tạo và tự may cho mình bộ đồ "Người nhện Siêu đẳng". Đúng lúc đó thì bác Ben qua đời vì một kẻ cướp bắn vào bụng. Peter nhớ những lời bác đã nói, quyết định đem sức mạnh người nhện cứu giúp mọi người. Nhưng Peter lại bị cha Gwen, cảnh sát trưởng New York cho là tội phạm và ra sức săn đuổi. Peter tỏ tình Gwen và cho cô biết bí mật về bản thân. Lúc này giáo sư Curt Connors biến thành The Lizard sau khi trực tiếp tiêm gen thằn lằn vào cơ thể. Trải qua nhiều lần chiến đấu Peter đánh bại được âm mưu biến cả thành phố thành thằn lằn của lão, được bố Gwen hiểu ra và giúp đỡ, nhưng không cứu được bố Gwen. Cái kết Phần 1,Peter hứa với bố Gwen là sẽ tránh xa cô để đảm bảo an toàn.